作為癌癥中最常見的基因改變，超過一半的人類癌癥具有導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄失活的p53突變。然而，p53如何調(diào)節(jié)免疫圖譜以創(chuàng)造免疫逃逸的生態(tài)位仍然難以捉摸。作者發(fā)現(xiàn)癌癥干細(xì)胞（CSCs）中建立了白細(xì)胞介素-34（IL-34）調(diào)控的生態(tài)位來促進(jìn)p53失活肝癌的腫瘤發(fā)生。機(jī)制上發(fā)現(xiàn)Il34是一個(gè)被p53轉(zhuǎn)錄抑制的基因，p53丟失導(dǎo)致CSCs分泌IL-34。IL-34誘導(dǎo)CD36介導(dǎo)的脂肪酸氧化代謝升高，驅(qū)動(dòng)泡沫樣腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）的M2極化。IL-34調(diào)節(jié)TAMs抑制CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫以促進(jìn)免疫逃逸。阻斷IL-34-CD36軸引起抗腫瘤免疫，并與抗PD-1免疫治療協(xié)同作用。本研究結(jié)果揭示了p53調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境的潛在機(jī)制，并為p53失活的癌癥免疫治療提供了潛在的靶點(diǎn)。

該研究于2024年10月8日發(fā)表在《Immunity》，IF：25.5

機(jī)制圖

主要研究結(jié)果

1. IL-34是p53失活驅(qū)動(dòng)的腫瘤發(fā)生所必需的

為了了解p53如何調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，用CRISPR-Cas9和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因組編輯系統(tǒng)生成p53缺陷（Trp53null）（Trp53+Pten，Trp53+Kras）和p53野生型（Trp53WT）（Ctnnb1+Pten，Kras+Pten）的自發(fā)性肝癌模型。接下來對(duì)Trp53WT和Trp53null腫瘤進(jìn)行了RNA-seq。細(xì)胞因子是腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，決定腫瘤微環(huán)境的組成。通過對(duì)RNA-seq數(shù)據(jù)的分析，注意到IL-34是Trp53null腫瘤上調(diào)基因中最明顯增加的細(xì)胞因子（圖1A）。q-PCR、ELISA和免疫印跡顯示，與WT肝臟、CCl4處理的肝臟和Trp53WT腫瘤相比，Trp53null腫瘤中IL-34的表達(dá)明顯更高（圖1B）。此外，從自發(fā)性肝癌模型中提取原發(fā)腫瘤細(xì)胞用于隨后的機(jī)制和移植實(shí)驗(yàn)，其中PT細(xì)胞來自Trp53null腫瘤（Trp53+Pten），CT細(xì)胞來自Trp53WT腫瘤（Ctnnb1+Pten）。

為確定哪個(gè)細(xì)胞亞群在腫瘤微環(huán)境中分泌IL-34，對(duì)Trp53null（Trp53+Pten）和Trp53WT（Ctnnb1+Pten）腫瘤進(jìn)行了單核RNA測(cè)序（snRNA-seq；10×Genomics）。在數(shù)據(jù)的質(zhì)量過濾后，使用Seurat進(jìn)行的無監(jiān)督聚類分析產(chǎn)生了14個(gè)聚類，然后使用已知的標(biāo)記對(duì)每個(gè)聚類進(jìn)行注釋。通過分析snRNA-seq數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)Il34在Trp53null腫瘤中的表達(dá)明顯高于Trp53WT腫瘤。在Trp53null腫瘤中，CSCs表現(xiàn)出強(qiáng)烈的IL-34表達(dá)，而在所有其他細(xì)胞類型中，IL-34的表達(dá)都很弱（圖1C-1F）。多重免疫組化染色顯示，IL-34和EpCAM在Trp53null腫瘤中共同定位（圖1G）。這些結(jié)果表明，在Trp53null腫瘤中，CSCs優(yōu)先分泌IL-34。這些結(jié)果共同表明p53失活的CSCs是分泌IL-34的主要細(xì)胞亞群。

為研究IL-34對(duì)Trp53null肝癌發(fā)展的潛在影響，首先評(píng)估了IL-34過表達(dá)的自發(fā)性肝癌模型（Ctnnb1+Pten）的進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)IL-34過表達(dá)顯著加速了Trp53WT肝癌的進(jìn)展。接下來生成了IL34^-/-小鼠，然后注射Trp53+Pten或Trp53+Myc質(zhì)粒來誘導(dǎo)自發(fā)性Trp53null肝癌。與Il34^+/-對(duì)照組相比，在Il34^-/-小鼠中沒有觀察到Trp53null肝癌的腫瘤發(fā)生，病理學(xué)家將接受Trp53+Pten質(zhì)粒的Il34?/-小鼠中的小病變確定為脂肪變性，而不是癌前病變或結(jié)節(jié)（圖1H-1K）。這些發(fā)現(xiàn)表明白細(xì)胞介素-34是p53失活驅(qū)動(dòng)的腫瘤發(fā)生所必需的。

圖1：p53失活的CSC異常高分泌IL-34促進(jìn)肝癌發(fā)生

2. p53功能缺失直接觸發(fā)IL-34分泌

考慮到在p53失活的CSCs中觀察到IL-34高表達(dá)，并考慮到p53作為轉(zhuǎn)錄因子的已知功能，推測(cè)p53可能抑制Il34轉(zhuǎn)錄。在CT細(xì)胞（Trp53+/+）和AML12細(xì)胞（小鼠肝細(xì)胞系）中，Trp53的基因缺失導(dǎo)致用Nutlin-3預(yù)處理細(xì)胞時(shí)無法增加p21的表達(dá)（圖2A和2E）。事實(shí)上，觀察到Trp53的基因缺失導(dǎo)致IL-34的表達(dá)上調(diào)（圖2B-2D和2F）。相比之下，在PT細(xì)胞中Trp53過表達(dá)時(shí)，IL-34轉(zhuǎn)錄被顯著抑制（Trp53-/-）（圖2G）。

與小鼠數(shù)據(jù)一致，HepG2細(xì)胞（人肝癌細(xì)胞，TP53WT）中TP53基因缺失后IL-34表達(dá)上調(diào)（圖2H-2J）。為了確定p53是否結(jié)合IL-34的調(diào)節(jié)區(qū)域，使用p53抗體進(jìn)行ChIP及高通量測(cè)序。在IL34和CDKN1A（p21）位點(diǎn)觀察到p53結(jié)合（圖2K）。ChIP-PCR和DNA下拉分析還顯示p53結(jié)合到IL34啟動(dòng)子（圖2L和2M）。這些結(jié)果表明p53直接抑制IL34轉(zhuǎn)錄。接下來探究p53是否調(diào)節(jié)IL34啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。構(gòu)建含有IL34啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒（轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)-2kb），并與WT p53過表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中。與空載體相比，p53過表達(dá)導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)化熒光素酶活性降低（圖2N）。請(qǐng)注意，當(dāng)與突變型p53（R249S或R175H）共轉(zhuǎn)染時(shí)，沒有觀察到這些降低（圖2O）。為確定IL34啟動(dòng)子上的結(jié)合區(qū)域，截?cái)嗔薎L34啟動(dòng)子，并注意到當(dāng)從-1,200到-800的區(qū)域缺失時(shí)，p53的調(diào)節(jié)活性喪失（圖2P）。值得注意的是，一個(gè)一致的p53結(jié)合位點(diǎn)（RRRCWWGYYY）34位于IL34啟動(dòng)子的-858至-838（圖2Q），并突變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)廢除了WT p53過表達(dá)時(shí)熒光素酶活性的降低（圖2R），這些數(shù)據(jù)表明p53直接抑制IL34轉(zhuǎn)錄，p53缺失和突變p53都失去了對(duì)IL34的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性。

圖2：p53功能喪失直接觸發(fā)IL-34分泌

3. IL-34誘導(dǎo)的促腫瘤泡沫樣巨噬細(xì)胞在p53失活的CSCs附近聚集

鑒于IL-34是一種參與單核細(xì)胞增殖、存活和分化為巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子，接下來通過CIBERSORT36調(diào)查肝臟腫瘤免疫細(xì)胞的組成，發(fā)現(xiàn)IL-34表達(dá)與巨噬細(xì)胞比例之間存在正相關(guān)關(guān)系。此外，snRNA-seq數(shù)據(jù)顯示Trp53null腫瘤中巨噬細(xì)胞的比例明顯高于Trp53WT腫瘤中的比例。然后對(duì)Trp53null腫瘤進(jìn)行了空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（10×Genomics）和注釋。發(fā)現(xiàn)許多MDMs（Lyz2，Cx3cr1）分布在IL34+細(xì)胞周圍（圖3A）。多重免疫組化染色進(jìn)一步證實(shí)TAMs在Trp53null腫瘤中分泌IL-34的CSC附近積累（圖3B）。接下來想探究Trp53null腫瘤中TAMs的特征，并對(duì)Trp53null和Trp53WT腫瘤中的TAMs進(jìn)行分類，以進(jìn)行RNA-seq。GO分析顯示，Trp53null腫瘤中的TAMs富集與促進(jìn)巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞分化相關(guān)的基因。GSEA表明，Trp53null腫瘤中的TAMs富集了脂滴特征。接下來使用BODIPY脂肪酸探針對(duì)TAMs進(jìn)行染色：Trp53null腫瘤中的TAMs比Trp53WT腫瘤中的TAMs積累了更多的脂肪酸，并形成了更多的脂滴（圖3C和3D）。表明Trp53null腫瘤中的TAMs類似于泡沫樣巨噬細(xì)胞。

為確定p53失活的CSCs是否通過IL-34誘導(dǎo)這些TAMs，首先使用IL-34在體外治療BMDMs，發(fā)現(xiàn)IL-34暴露顯著增加細(xì)胞內(nèi)脂肪酸并促進(jìn)BMDMs中脂滴的形成（圖3E和3F）。此外，IL-34暴露還上調(diào)了M2相關(guān)標(biāo)志物（例如，MRc1、Arg1、Ccl2、TGFβ和IL-10）的表達(dá)。值得注意的是，CCL2負(fù)責(zé)CCR2+單核細(xì)胞的招募。接下來，將BMDM與Trp53^+/+或Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)，并檢測(cè)來自Trp53^+/+或Trp53^-/-腫瘤的TAMs。與Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的BMDM和來自Trp53^-/-腫瘤的TAMs積累了更多的脂肪酸，并且更傾向于促腫瘤表型。請(qǐng)注意，Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞中Il34的基因缺失消除了BMDM和TAMs的這些變化（圖3G、3H）。這些結(jié)果支持IL-34負(fù)責(zé)促進(jìn)Trp53null腫瘤中TAMs的脂質(zhì)積累和促腫瘤極化。

圖3：IL-34在CSCs附近誘導(dǎo)p53失活的泡沫樣TAMs

4. IL-34通過CD36促進(jìn)脂肪酸攝取，并通過FAO代謝重編程誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的促腫瘤極化

接下來想知道IL-34如何促進(jìn)TAMs中的脂質(zhì)積累。因此使用脂肪酸BODIPY FL C12探針進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)IL-34暴露的BMDMs中脂肪酸攝取顯著較高（圖4A）。RNA-seq分析顯示，IL-34暴露的BMDMs中CD36的表達(dá)升高），CD36與長(zhǎng)鏈脂肪酸的結(jié)合有高親和力。qPCR和流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)，IL-34處理導(dǎo)致BMDMs中CD36表達(dá)顯著增加（圖4B和4C）。然而，在使用CD36抑制劑磺基琥珀酰亞胺油酸酯（SSO）或CD36抗體預(yù)處理BMDMs時(shí)，IL-34暴露并沒有促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)積累（圖4D和4E），這支持了CD36是TAMs脂肪酸含量升高的原因。PPAR-γ是編碼具有脂質(zhì)調(diào)節(jié)活性的蛋白質(zhì)的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，包括CD36。因此推測(cè)IL-34可能通過上調(diào)PPAR信號(hào)活性來促進(jìn)CD36的表達(dá)。

先前的研究表明，IL-4通過代謝重編程誘導(dǎo)M2樣巨噬細(xì)胞極化，從而顯著提高脂肪酸氧化（FAO）作為能量來源。IL-34可能誘導(dǎo)類似的代謝重編程以促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2樣巨噬細(xì)胞極化的想法，GSEA分析表明，在IL-34暴露的BMDM中，F(xiàn)AO基因被富集和上調(diào)（圖4F）。與糖酵解相比，F(xiàn)AO消耗更多的氧并產(chǎn)生更多的ATP。Seahorse分析表明，IL-34暴露增加了BMDM的氧消耗，并且這種增加在用FAO酶CPT1的抑制劑（依托莫昔爾）預(yù)處理細(xì)胞時(shí)被阻止（圖4G）。這些發(fā)現(xiàn)共同支持IL-34可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向FAO能量代謝重編程。然而，作者又注意到IL-34暴露并沒有引起CD36沉默的RAW264.7細(xì)胞（巨噬細(xì)胞系）耗氧量和M2樣巨噬細(xì)胞極化的增加（圖S4E-S4H）。在用SSO或依托莫西預(yù)處理BMDMs時(shí)，IL-34暴露也沒有促進(jìn)M2樣巨噬細(xì)胞極化（圖4H和4I）。也就是說，當(dāng)CD36和FAO被破壞時(shí)，IL-34無法誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2樣的巨噬細(xì)胞極化，這支持了它們是巨噬細(xì)胞極化過程的重要組成部分。由于IL-34誘導(dǎo)CD36表達(dá)，并且IL-34和CD36都是向FAO重編程所必需的，提出了“IL-34-CD36軸”負(fù)責(zé)形成泡沫樣的促腫瘤TAMs。

圖4：IL-34通過CD36促進(jìn)脂肪酸攝取并通過FAO代謝重編程誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化

5. IL-34-CD36介導(dǎo)的代謝重編程以驅(qū)動(dòng)Trp53null腫瘤中TAMs的促腫瘤極化

接下來研究了IL-34-CD36軸在Trp53null腫瘤中泡沫樣促腫瘤TAMs中的參與。首先與Trp53^+/+或Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)BMDMs。與Trp53^+/+腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的BMDMs相比，用Trp53^+/+腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的BMDMs中CD36和FAO基因Cpt1a的表達(dá)顯著高于用Trp53^+/+腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的BMDMs（圖5A和5B）。值得注意的是，Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞中Il34的基因缺失消除了BMDMs中CD36和Cpt1a的表達(dá)增加（圖5C和5D）。因此，Trp53^-/-腫瘤細(xì)胞分泌的IL-34可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中的CD36表達(dá)和FAO誘導(dǎo)。還重新分析了Trp53null肝臟腫瘤的snRNA-seq數(shù)據(jù)，并注意到CD36的表達(dá)在MDMs中最高。MDM的KEGG分析表明富集了包括脂肪酸降解和脂肪酸代謝在內(nèi)的途徑。流式細(xì)胞術(shù)分析還顯示，Trp53null肝臟腫瘤的TAMs中CD36的表達(dá)明顯高于Trp53WT肝臟腫瘤的TAMs（圖5E）。請(qǐng)注意，通過多重免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)Trp53null肝臟腫瘤中確實(shí)存在特異性表達(dá)CD36的TAMs群體（圖5F）。這些發(fā)現(xiàn)共同支持IL-34誘導(dǎo)CD36介導(dǎo)的脂肪酸代謝變化，以驅(qū)動(dòng)Trp53null腫瘤中泡沫樣巨噬細(xì)胞的M2樣巨噬細(xì)胞極化。為了提供IL-34-CD36軸促進(jìn)體內(nèi)TAM脂質(zhì)積累和M2樣巨噬細(xì)胞極化的直接證據(jù)，首先構(gòu)建了IL-34過表達(dá)的CT細(xì)胞（Trp53_+/+）和IL-34消融的PT細(xì)胞（Trp53^-/-），然后將這些細(xì)胞皮下接種到小鼠體內(nèi)，觀察到IL-34過表達(dá)腫瘤中TAMs的百分比高于CT腫瘤，IL-34過表達(dá)顯著增加了TAMs中CD36和CD206的表達(dá)以及脂質(zhì)含量。這些結(jié)果共同證明了IL-34-CD36軸驅(qū)動(dòng)Trp53null腫瘤中泡沫樣巨噬細(xì)胞的M2樣巨噬細(xì)胞極化。

圖5：IL-34協(xié)調(diào)CD36介導(dǎo)的代謝重編程以驅(qū)動(dòng)Trp53^null腫瘤中TAMs的促腫瘤極化

6. IL-34調(diào)控的TAMs抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸

接下來討論了IL-34誘導(dǎo)的TAMs在腫瘤發(fā)育中的作用，觀察到IL-34在PT腫瘤中的遺傳缺失導(dǎo)致小鼠明顯的生長(zhǎng)受限（圖6A）。然而，通過注射氯膦酸脂質(zhì)體對(duì)巨噬細(xì)胞的系統(tǒng)性消耗消除了IL-34缺陷的PT腫瘤和對(duì)照PT腫瘤之間腫瘤生長(zhǎng)的差異（圖6A、6B）。這些數(shù)據(jù)表明IL-34調(diào)控的TAMs促進(jìn)腫瘤免疫逃避。

TAMs可以通過抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫來促進(jìn)腫瘤免疫逃逸，從snRNA-seq數(shù)據(jù)來看，Trp53null腫瘤中腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞的比例明顯低于Trp53WT腫瘤。接下來研究了腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞的特征，并將Trp53null和Trp53WT肝臟腫瘤中的T細(xì)胞（CD45+CD3+）進(jìn)行了RNA-seq。差異基因分析顯示，Trp53null腫瘤中的T細(xì)胞比Trp53WT腫瘤中的T細(xì)胞具有更高的耗盡標(biāo)志物表達(dá)（例如，Pdcd1，Ctla4，Lag3和havcr2）（圖6C）。流式細(xì)胞術(shù)顯示，Trp53null腫瘤中的CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ和TNF-α低于Trp53WT腫瘤（圖6D）。接下來從Trp53null和Trp53WT肝腫瘤中篩選TAMs，并將它們與脾T細(xì)胞共同培養(yǎng)用于體外T細(xì)胞抑制試驗(yàn)：來自Trp53null腫瘤的TAMs對(duì)T細(xì)胞增殖和IFN-γ產(chǎn)生的抑制能力強(qiáng)于來自Trp53WT肝腫瘤的TAMs。這些數(shù)據(jù)表明來自Trp53null腫瘤的TAMs可能抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫。值得注意的是，PT（Trp53^?/?）腫瘤中IL-34的基因缺失導(dǎo)致腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞增加（圖6E）。來自IL-34缺陷PT腫瘤的腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞比來自對(duì)照PT腫瘤的T細(xì)胞表達(dá)較低的PD-1和較高的IFN-γ和TNF-α（圖6F-6H）。類似地，TAMs上CD36的條件性基因缺失導(dǎo)致PT腫瘤明顯的生長(zhǎng)限制，但沒有導(dǎo)致CT（Trp53^+/+）腫瘤（圖6I），并導(dǎo)致PT腫瘤中腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞增加（圖6J）。然而，當(dāng)小鼠接受CD8抗體腹腔注射時(shí)，IL-34缺陷PT腫瘤和對(duì)照PT腫瘤中腫瘤生長(zhǎng)的差異完全丟失（圖6K）。這些數(shù)據(jù)共同表明，IL-34-CD36軸編排的TAMs通過抑制Trp53null肝癌中T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫來促進(jìn)腫瘤逃逸免疫。

圖6：IL-34調(diào)控的TAMs抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸

7. 阻斷IL-34信號(hào)可作為TP53突變癌癥的潛在免疫療法

鑒于IL-34-CD36軸誘導(dǎo)的TAMs在Trp53缺失的肝臟腫瘤中促進(jìn)腫瘤免疫逃避，想了解阻斷IL-34-CD36軸是否可以抑制腫瘤生長(zhǎng)。用IL-34或CD36的中和抗體處理Trp53^?/?PT荷瘤小鼠。IL-34或CD36的抗體阻斷導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)明顯受限（圖7A和S7A）。通過IL-34或CD36的抗體阻斷，單核細(xì)胞TAMs的比例顯著降低，TAMs的脂質(zhì)含量和CD206表達(dá)降低。此外，阻斷IL-34或CD36導(dǎo)致T細(xì)胞浸潤(rùn)和產(chǎn)生IFN-γ和TNF-α的T細(xì)胞百分比顯著增加。值得注意的是，抗IL -34和抗CD6聯(lián)合治療PT荷瘤小鼠，對(duì)小鼠的生長(zhǎng)限制更強(qiáng)，存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)（圖7B和7C）。這些數(shù)據(jù)表明，IL-34-CD36軸是p53失活肝癌的潛在治療靶點(diǎn)。

與之前的報(bào)道一致，皮下和肝臟接種的Trp53-PT腫瘤對(duì)抗PD-1治療沒有反應(yīng)（圖7D-7F）。然而，Il34的基因缺失與抗PD-1聯(lián)合強(qiáng)烈協(xié)同抑制腫瘤生長(zhǎng)，導(dǎo)致高達(dá)75%的病例完全緩解（圖7D-7F）。隨后通過再次治療完全緩解的小鼠來檢查聯(lián)合阻斷是否賦予長(zhǎng)期免疫。注意到與新生小鼠相比，再次治療的小鼠仍然可以拒絕PT腫瘤（圖7G）。IL-34，CD36和PD-1的聯(lián)合治療完全阻斷了Trp53-PT腫瘤的發(fā)展（圖7H），甚至在已建立的較大腫瘤中引起強(qiáng)烈的生長(zhǎng)限制（圖7I和7J）。之后研究了IL-34在TP53突變的人肝癌中的高表達(dá)是否會(huì)增加CD36+促腫瘤巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)。對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫的分析顯示，TP53突變的肝癌比TP53 WT的肝癌有更大程度的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。通過利用TISIDB網(wǎng)站，IL34的表達(dá)與巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)豐度呈正相關(guān)。通過利用TIMER 2.0網(wǎng)站，IL34的表達(dá)與CD36、TGFB1和CCL2的表達(dá)呈正相關(guān)。對(duì)TP53突變肝癌的公共單細(xì)胞RNA-seq數(shù)據(jù)的分析表明，高表達(dá)IL34的腫瘤細(xì)胞和TAMs表現(xiàn)出CD36的強(qiáng)勁表達(dá)，而它們?cè)谒衅渌?xì)胞類型中的表達(dá)都很弱。此外染色顯示，與TP53 WT相比，TP53突變的肝癌增加了CD36+TAM浸潤(rùn)，接受ICI治療的TP53突變的癌癥患者總生存率較低?？偟膩碚f，研究結(jié)果表明阻斷IL-34信號(hào)可能是TP53突變癌癥患者的潛在免疫治療。

圖7：阻斷IL-34信號(hào)通路抑制p53失活誘導(dǎo)的肝癌生長(zhǎng)

結(jié)論

本項(xiàng)研究中，作者揭示了 IL-34 在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。作者發(fā)現(xiàn) IL-34 被 p53 轉(zhuǎn)錄抑制，p53 轉(zhuǎn)錄功能的喪失導(dǎo)致 IL-34 表達(dá)上調(diào)，從而塑造了驅(qū)動(dòng)腫瘤免疫逃逸的免疫抑制生態(tài)位。因此，IL-34 塑造腫瘤微環(huán)境是 p53 失活腫瘤的常見特征，阻斷 IL-34 信號(hào)傳導(dǎo)可作為靶向 p53 泛突變的治療策略。

實(shí)驗(yàn)方法

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃脱芯繀⑴c者詳細(xì)信息；CRISPR Cas9等構(gòu)建質(zhì)粒；自發(fā)性肝癌模型；流式細(xì)胞儀和細(xì)胞分選；ELISA；線粒體、脂肪酸攝取和脂質(zhì)含量測(cè)定；細(xì)胞能量代謝分析；熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定；T細(xì)胞抑制試驗(yàn)；RNA-Seq和數(shù)據(jù)分析；DNA pull-down；單核RNA測(cè)序和數(shù)據(jù)分析；空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)定；腫瘤移植、抗體治療和巨噬細(xì)胞耗盡；分析TCGA/ICGC數(shù)據(jù)和公共scRNA-seq數(shù)據(jù)

參考文獻(xiàn)

Nian Z, Dou Y, Shen Y, Liu J, Du X, Jiang Y, Zhou Y, Fu B, Sun R, Zheng X, Tian Z, Wei H. Interleukin-34-orchestrated tumor-associated macrophage reprogramming is required for tumor immune escape driven by p53 inactivation. Immunity. 2024 Oct 8;57(10):2344-2361.e7. doi: 10.1016/j.immuni.2024.08.015. Epub 2024 Sep 24. PMID: 39321806. IF: 25.5 Q1.