鐵死亡，作為鐵依賴的脂質活性氧累積引發的一種程序性死亡方式，這種死亡方式廣泛存在于多種病理狀態，各類細胞抵抗鐵死亡的能力也有所差別。一篇發表在Developmental Cell上面的文章為大家帶來了鐵死亡抵抗的新思路，外泌體和鐵死亡的故事正在上演。

文章思路：

結 果：
1. Prominin2是一種鐵死亡應激反應蛋白
    細胞從細胞外基質（ECM）中脫離是一種促鐵死亡應激。比較附著和ECM分離的MCF10A永生乳腺上皮細胞中mRNA表達，發現ECM分離的MCF10A細胞中prominin2迅速上調，在分離的Hs578t乳腺癌細胞也有PROM2增加。在MCF10A和Hs578t細胞中沉默prominin2均導致在ECM分離條件下喪失生存能力，鐵死亡抑制劑的處理能挽救細胞活力，泛caspase抑制劑沒有此效應。MCF10A和Hs578t細胞用GPX4抑制劑RSL3處理后prominin2表達升高，另一種乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞無此效應。MCF10A和Hs578t細胞對誘導細胞死亡的RSL3的耐藥濃度高達2.5 mM，而低至0.5 mM的RSL3濃度即能殺死MDA-MB-231細胞。

2. prominin2增加鐵死亡抵抗
    GPX4抑制劑RSL3和ML210、間接GPX4抑制劑FIN56、GSH消耗劑erastin， MCF10A細胞對這些化合物的抵抗力比Hs578t細胞強，沉默prominin2敏感性增加。鐵蛋白抑制素1可拯救prominin2缺失的細胞的活力喪失，表明對prominin2缺失細胞的高敏感性不是由另一種誘導細胞死亡模式引起的。MDA-MB-231細胞過表達prominin2可抑制RSL3，ML210，FIN56和Estin引起的細胞死亡。

3.Prominin2促進多囊泡和外泌體的形成
    Prominin2響應RSL3對GPX4的抑制而定位在離散的細胞質中，GPX4抑制后觀察到prominin2和TSG101（多囊泡MVB的標記物），這種共定位在核周區域中最為突出。經RSL3處理的MCF10A細胞含有更多的MVB，在prominin2沉默的細胞中沒有觀察到這種作用。在Prominin2缺失的MCF10A和Hs578t細胞中顯示TSG101陽性細胞減少，MDA-MB-231中外源性prominin2表達增加了TSG101陽性數量，鐵死亡敏感性降低。TSG101表達的減少增加了MCF10A和Hs578t細胞對RSL3誘導的細胞死亡的敏感性，ferrostatin-1可挽救這一死亡。這些數據表明GPX4抑制刺激prominin2的表達和prominin2依賴性MVB的形成，促進鐵死亡抗性。
    MVB可以與質膜融合并釋放ILV如外泌體，在RSL3處理細胞中觀察到MVB中的ILV與外泌體的大小一致。經RSL3處理的細胞存在大量的外泌體蛋白，表明GPX4抑制增加外泌體形成。這些外泌體包含prominin2，CD63和TSG101，表明它們是由prominin2依賴性MVB形成所產生的。抑制外泌體釋放增加了MCF10A和Hs578t細胞對RSL3的敏感性，但不影響敲低prominin2的細胞的活力。

4.MVB /外泌體鐵運輸促進鐵死亡抵抗
    在RSL3處理過的MCF10A和Hs578t細胞中觀察到鐵蛋白與prominin2共定位，這些細胞中的外泌體中含有鐵蛋白。RSL3處理MDA-MB-231，鐵蛋白表達不增加，過表達prominin2的細胞鐵蛋白增加。MCF10A和Hs578t細胞中敲低鐵蛋白重鏈（FTH1）和輕鏈（FTL）增加了GPX4抑制所觸發的細胞死亡，這一死亡可由鐵制抑素1或鐵螯合劑去鐵胺（DFO）修復。對照和RSL3處理的MCF10A和Hs578t細胞的游離鐵濃度無明顯差異，但當敲除prominin2或FTH1和FTL后游離鐵濃度增加，Prominin2過表達防止RSL3反應性鐵離子濃度的增加。降低TSG101表達阻滯MVB途徑增加細胞內鐵濃度。這些結果表明阻塞MVB /外泌體介導的鐵蛋白輸出導致GPX4抑制后細胞內鐵含量積累。

5.ECM分離的細胞通過Prominin2介導的MVB/外泌體形成抵抗鐵死亡
    ECM分離的prominin2敲低的MCF10A和Hs578t細胞的鐵死亡可被鐵螯合劑去鐵胺修復，鐵輸出缺陷促進細胞死亡。ECM分離增加了prominin2細胞的游離鐵濃度，ECM脫離增加MVB，并且這種增加取決于prominin2。MVB與質膜融合表明有外泌體釋放， ECM分離的MCF10A和Hs578t細胞中有明顯的prominin2和TSG101的共定位。這些表明生理的鐵死亡應激可被prominin2/MVB鐵輸出途徑所規避。