長鏈非編碼RNAs（LncRNAs）在各種人類癌癥中都出現失調，并控制腫瘤的發生和進展。然而，LncRNAs失調的上游機制仍不清楚。這項研究證明了肝細胞核因子1同源框A反義RNA 1（HNF1A-AS1）在胃癌（GC）組織中表達顯著上調。過表達HNF1A-AS1促進細胞增殖和細胞周期進程，而敲除HNF1A-AS1得到的實驗結果則相反。早期生長反應蛋白1（EGR1）直接結合HNF1-As1啟動子區域并激活其轉錄。過表達EGR1增強了細胞增殖并促進了細胞周期進程，與HNF1-As1的功能相似。HNF1A-AS1可作為競爭性內源性RNA(ceRNA)與miR-661結合，上調miR-661直接靶向的細胞分裂周期蛋白34(CDC34)的表達。研究還發現EGR1和HNF1A-AS1可以促進細胞周期素依賴性激酶2(CDK2)、CDK4和細胞周期素E1的表達，并通過促進CDC34介導的p21泛素化的降解而抑制p21的表達。

綜上所述，這些發現表明EGR1激活HNF1A-AS1調節各種促生長因子和抗生長因子以促進GC的發展，暗示它可能作為治療干預該病的靶點。

實驗路線：

實驗結果：

1. HNF1A-AS1促進細胞增殖和細胞周期進程

A: HNF1A-AS1在胃癌組織中高表達。B-C: HNF1A-AS1促進細胞增殖。D-G：HNF1A-AS1增加細胞代謝活性。H-I：HNF1A-AS1促進細胞非貼附性生長。J-K：HNF1A-AS1促進細胞遷移和侵襲能力。L-O：HNF1A-AS1促進腫瘤的形成。

2. HNF1A-AS1促進細胞周期進程

A: 過表達HNF1A-AS1增加S期細胞比例。B：沉默HNF1A-AS1減少S期細胞比例。C-D：過表達或沉默HNF1A-AS1細胞凋亡不發生改變。

3. EGR1直接與HNF1-As1啟動子結合

A：HNF1-As1啟動子上游2000bp序列。B：啟動子不同區域活性分析。C：啟動子結合區域活性分析。D-K: EGR1促進HNF1-As1的表達。F：HNF1-As1啟動子與EGR1結合區域引入三個點突變。G-J: EGR1直接與HNF1-As1啟動子結合。K：在人類胃癌組織中EGR1與HNF1-As1的表達正相關。

4. EGR1促進細胞增殖并加快細胞周期進程

A：EGR1促進細胞增殖。 B：EGR1增加細胞代謝活性。C：EGR1增加細胞非貼附性生長。E：EGR1促進cyclinE、CDK4、CDK2的表達，降低P21的表達。D：EGR1增加S期細胞比例。F：EGR1不影響細胞凋亡。

5. HNF1-As1促進P21的泛素化降解

A：HNF1-As1促進cyclinE、CDK4、CDK2的表達。B-C：HNF1-As1降低P21的表達。D-K: 過表達或沉默HNF1-As1不影響P21 mRNA的表達。L-M：過表達HNF1-As1降低P21的穩定性。N-Q：過表達HNF1-As1， MG-132處理細胞后P21表達增加。 R：過表達HNF1-As1后EGR1的泛素化降解增加。S：過表達HNF1-As1小鼠癌癥組織中P21表達下降。

6. HNF1-As1通過CDC34調控P21泛素化降解

A-B：過表達CDC34導致P21表達下降。 C-J：過表達或沉默CDC34，P21 mRNA表達水平不發生改變。 K-N：過表達CDC34，P21的半衰期縮短。 O-P：過表達CDC34，MG-132處理細胞后內源性P21增加。 Q：挽救實驗。沈默CDC34可以恢復由過表達HNF1-As1引起的P21蛋白的下降。

7. HNF1-As1作為ceRNA發揮作用

A：共同靶向HNF1-As1及CDC34的miRNA。B-C：miR-661和miR-663可結合HNF1-As1。 D-E：miR-661可結合CDC34.。F：只有miR-661能夠在兩種胃癌細胞系中同時降低CDC34的表達。 G-I：miR-661抑制細胞的遷移、侵襲和增殖。 J：RIP實驗表明miR-661可以和HNF1-As1及CDC34結合。 K-L：miR-661可以富集到HNF1-As1和CDC34。M-N：過表達CDC34后HNF1-As1表達上調，沉默CDC34后HNF1-As1表達下調。

8. 作用機制圖